抽象
Camellia sinensisの葉に存在するエピガロカテキン-3- O – (3- O-メチル)ガレート(EGCG3″ Me)は、人間の健康にとって有益な生物学的活性を多く持っています。しかし、EGCG3″ Meは非常に限られた量で茶葉に自然に発生します。EGCG3″ Meの合成を触媒するC.シネンシス由来の酵素を見つけることは、自然の状況でEGCG3″ Meの不足を補うための代替方法である。本研究では、カフェオイル – コエンザイムA O – メチルトランスフェラーゼ(CCoAOMT)遺伝子の相補的DNA(cDNA)コード領域およびゲノムDNAをC. sinensis(CsCCoAOMTと命名)から単離した。のヌクレオチド配列分析CsCCoAOMTは、ドデシル硫酸ナトリウム – ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)の結果とよく相関する、予測分子量28 kDaのポリペプチドをコードする738 bpのオープンリーディングフレームを明らかにした。全長DNA配列(2678bp)は5つのエクソンと4つのイントロンを含んでいた。CsCCoAOMTの推定アミノ酸配列は、Codonopsis lanceolataおよびBetula luminiferaからのCCoAOMTと92%の同一性を共有した。CsCCoAOMTの触媒活性を分析した。3つのモノメチル化エピガロカテキン−3− O−没食子酸(EGCG)化合物(EGCG4” Me、EGCG3” Me、およびEGCG3’Me)を、Kmを用いてCsCCoAOMTによって製造した。マイクロモル範囲で。リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)実験はCsCCoAOMT転写産物が葉の成熟の初期段階(シュートの最初の葉と芽)の間に低レベルで存在したが相対的発現は葉の進行段階で増強されたことを示したこれは新鮮な葉のEGCG3″ Me含有量の変化とよく一致していた。それ故、我々はCsCCoAOMTがメチル化EGCGの合成を触媒すると結論した。
キーワード
茶(Camellia sinensis) O-メチルトランスフェラーゼ CsCCoAOMT 原核生物の発現 触媒活性 メチル化エピガロカテキン-3 – O-没食子酸塩(EGCG)
プロジェクトは、中国浙江省自然科学財団(No. Y3080088)、中国国家自然科学財団(No. 30972404)、中国農業研究制度指定基金(No. CARS-23)、および科学技術省によって支援されました。中国農業科学アカデミーの技術革新プロジェクト(No. CAAS-ASTIP-2014-TRICAAS-OX)
ORCID:越ZHANG、http : //orcid.org/0000-0001-5793-6318 / 0000-0001-5793-6318。Hai − pen LV、http://orcid.org/0000−0002−4644−4323/ 0000−0002−4644−4323。Zhi LIN、http://orcid.org/0000-0001-6738-6663 / 0000-0001-6738-6663
茶樹脂中のケラチ酸補酵素Aオキシドトランスファー酵素の遺伝子及びそれらの触媒活性研究
まとめ
目的
エチル化EGCGを生成するための触媒としては、エチル化EGCGを合成することができる。メチル化EGCGのさらなる発展は、専門家による技術的なアドバイスによってもたらされる。
创新点
本研究は、茶樹脂から CCoAOMT遺伝子配列の配列を初めて見出した。CCoAOMT遺伝子の分析は、異なる茶樹脂種および異なる成熟度の茶褐色中の遺伝子発現基準に従う。CCoAOMTは、触媒的に合成されたメチル化EGCGの生物活性を有することが証明された。
方法
采用聚合酶链式反应(PCR)和序列分析获得CCoAOMT的编码序列和基因组序列。酵素反応により生成したメチル化EGCG生成物を高効率液体クロマトグラフィー – 四重極 – フライングタイム – シリアルクロマトグラフィー(HPLC − QTOF − MS)を用いて分析した(図4)。采用实时荧光定量PCR分析CCoAOMT基因的表达差异(图5)。
お問い合わせ
本研究により、CCoAOMT遺伝子のコード配列(738bp)および遺伝子群配列(2678bp)が、4つの内在性子および5つの外来性子を有することが明らかにされた。CCoAOMTは、EGCGがEGCG4” Me、EGCG3” MeおよびEGCG3t’Meなどの多くのメチル化生成物を生成することを触媒することができることを示している。CCoAOMTがメチル化EGCGを触媒生成する活性を有することを証明した。そして、この遺伝子の発現量は、茶の実の成熟度と非常に低いことがわかった。